ELISA這個方法的原理，大家都很明白，可真正用起來的時候，偶然間就會有點犯糊涂，怎樣靈活應用ELISA這個檢測方法以及怎樣去挑選ELISA試劑盒。有些客戶會用OVA（卵清卵白）做一些哮喘，過敏性腸炎的模型，然后會檢測粘膜特異性的sIgA以及血清內里IgG，IgE等指標。
ELISA檢測方法簡單，靈敏度高，為ELISA檢測血清或者培養上清的細胞因子、胰島素、激素等排泄型的小分子卵白的定量檢測；病原體抗原的定性與定量；評估自己制備的血清抗體的效價等。很多客戶有個誤區，拿來一個指標就想當然地嘗試用ELISA去檢測，我還是建議多動腦，該檢測活性的檢測活性。
對付一些小分子的檢測，例如：前線腺素、糖皮質激素的檢測，我的理解是要用競爭法ELISA去檢測，也要購買采用這個方法的盒試劑盒。ELISA試劑盒一般細胞因子的檢測，都是采用常規的夾心法ELISA檢測，由于因子分子量比力大，一般10幾個KD左右，很容易找到兩個或多個抗原表位。
小分子很難找到兩個不通的表位，也就決定了包被抗體和檢測抗體無法同時結合小分子并固相化。解決方案便是酶標板上包被二抗，每個孔加入一定量的酶標的小分子，然后加樣品，再加不帶標志的檢測抗體，顯色底物。樣品的目標小分子的含量越高，吸光度越低。