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栽培奇楠沉香及其叶片的急性毒性研究
2022-09-13 21:46

【黎苗药材】热科2号栽培奇楠沉香及其叶片的急性毒性研究

 

永发沉香合作社 2022-09-03 17:28 发表于福建

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基金项目:海南省自然科学基金项目(221RC633320RC714);海南省重大科技计划项目(ZDKJ2021031);财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系资助 (CARS-21)

作者简介董文化 (1983— )男,博士,研究方向为天然产物化学。 E-mail: dongwenhua@itbb.org.cn

*作者戴好富 (1974— )男,博士,研究员,研究方向为天然产物化学E-maildaihaofu@itbb.org.cn

 

热科2号栽培奇楠沉香及其叶片的急性毒性研究

董文化1,余珍1, 2,冯丁山3,谌子旸2,郭志勇2,梅文莉1,戴好富1 *

1中国热带农业科学院热带生物技术研究所 /海南热带农业资源研究院 /海南省沉香工程技术研究中心  海南海口  571101;2三峡大学生物与制药学院  湖北宜昌  443002;3海南省疾病预防控制中心  海南 海口  570203

摘要随着热科2号栽培奇楠沉香的大量推广,市场上奇楠沉香的产量逐年增加,为了更好的开发利用栽培奇楠新资源,需要对栽培奇楠沉香的安全性进行评价。采用小鼠急性经口毒性试验,观察实验动物所产生的毒性反应,评价受试物的毒性作用。栽培奇楠沉香及其叶片的提取物雌雄小鼠经口LD50剂量均大于10.0 g/Kg体重,属实际无毒级。试验期间实验动物生长良好,活动、摄食、饮水正常,毛色光泽度好,未见明显中毒症状和死亡。到期处死动物进行大体解剖检查,各脏器未见异常结果表明热科2号栽培奇楠沉香及其叶片提取物急性毒性分级属于无毒级物质,为栽培奇楠沉香药用和食用的开发利用提供参考。

关键词热科2号;栽培奇楠沉香;急性毒性

Study on the Acute Toxicity of the Agarwwod

and it’s Leaves of ‘Reke 2’ Cultivated “Qi-Nan

DONG Wenhua1, 2, YU Zhen1, 2, FENG Dingshan3, CHEN Ziyang 2, GUO Zhiyong 2, MEI Wenli 1, DAI Haofu1 *

(1. Hainan Engineering Research Center of Agarwood, Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Hainan Institute for Tropical Agricultural Resources, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Haikou 571101, Hainan; 2. College of Biological Pharmaceutical Sciences of China Three Gorges University, Yichang 443002, Hubei; 3. Hainan Center for Disease Control & Prevention, Haikou 570203, Hainan)

Abstract: With the extensive popularization of the Aquilaria sinensis ‘Reke 2’ cultivated “Qi-Nan” agarwood, the output of “Qi-Nan” agarwood is increasing year by year on the market. In order to make better use of the new resources of cultivated “Qi-Nan” agarwood, it is necessary to evaluate the safety of cultivated “Qi-Nan” agarwood. The acute oral toxicity test in mice was used to observe the toxicity of the experimental animals and evaluate the toxicity of the test objects. The oral LD50 of both male and female mice of cultivated “Qi-Nan” agarwood and its leaves were higher than 10.0 g/Kgbw, which belonged to actual non-toxic grade. During the experiment period, the experimental animals grew well, and their behaviors, feeding, drinking and outer appearance were all normal. No obvious pathological changes of inherent organs were found by anatomical examination. The result showed that ‘Reke 2’ cultivated “Qi-Nan” agarwood and its leaves belonged to non-toxic substances, which can provided a reference for the development and utilization of the medicine and edible of cultivated Qi-Nan” agarwood in future.

Keywords: Aquilaria sinensis Reke 2’; cultivated Qi-Nan agarwood; acute toxicity

    奇楠是一种高品质沉香,又名伽蓝、伽楠、伽羅、琪南、伽南沉等,其国产基源植物来源于白木香(土沉香)[Aquilaria sinensis (Lour.) Spreng.][1]1474年黄衷在《粤海香语》中将奇楠称为“伽”:伽杂出海上诸山,凡香木之枝柯窍露者,木立死而本存者,气性皆温,故为大蚁所穴,大蚁所食石蜜遗渍其中,岁久渐浸,木受石蜜气多,凝而坚润,则成伽。1495年陈让在《海外逸说》描述奇楠“味辣有脂,嚼之粘牙,其气上升,故老人佩之,少便溺焉”。

       643年方以智的百科全书《物理小识》记载奇楠的入药使用[2]:“伽糖结末作膏,贴会阴穴,则溺不出”。1647年卢之颐的《本草乘雅》首次将奇楠沉香载入医书:“奇南与沉同类,因树分牝牡,则阴阳形质…成南之本为牡为阳,故味辛辣,臭显发,性禁止,能闭二便,阳体而阴用,卫外而为固也[3]”。到清朝时期,伽南在皇宫中被制成平安丸使用,其用量大,往往需要提前准备,如果没有伽南香,以上好的沉香代之 [4]。随着使用奇楠入药逐年增加,奇楠沉香的药用理论也逐渐成熟,所以在清代龙柏的《药性考》才详细记载了奇楠沉香的药用:“伽味辛,下气辟恶,风痰闭塞,精鬼蛊着,通窍醒神,邪风追却[5]”。之后因为奇楠沉香的资源珍稀和历史原因,奇楠只闻其声未见其形,导致后来《中国药典》没有收载奇楠作为药用。

    近年来,随着人工栽培奇楠沉香的出现,特别是中国热带农业科学院热带生物技术研究所选育的“热科2号白木香”(琼R-ETS -AS-003-2017)品种的大面积推广,其所产的沉香具有高油脂含量及高2-2-苯乙基)色酮含量,符合奇楠沉香的特征[6-10],因此奇楠沉香资源的药用及深加工成为可能。为了进一步开发利用栽培奇楠沉香,对“热科2号”所产的奇楠沉香及其叶片进行急性毒性研究,初步评价其食用安全性。

材料和方法

1.1样品来源

    样品来源于广东省茂名市电白区沉香基地,栽培奇楠沉香为人工打洞结香12个月,由中国热带农业科学院热带生物技术研究所戴好富研究员鉴定为“热科2号”白木香Aquilaria sinensis ‘Reke 2’,标本编号为RK12202005;栽培奇楠沉香叶采自 “热科2号”白木香成熟嫩叶,标本编号为RK12202110,标本均保存于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。

1.2样品制备

       1.1.1  热科2奇楠沉香提取液制备:取样品20.0 g先将样品进行粉碎,再用9%乙醇进行回流提取,过滤后减压浓缩,回收乙醇,获得20.0 g棕色液体称取10.0 g,加植物油至20.0 mL,搅拌混匀后作为受试液备用。

       1.1.2  热科2奇楠沉香叶提取液制备:取样品50.0 g,先将样品进行粉碎,再用水回流提取,过滤后减压浓缩,获得50 g棕色液体称取10.0 g,加纯水至20.0 mL,搅拌混匀后作为受试液备用。

1.2 实验动物及饲养条件

     SPFKM小鼠,由海南省药物研究所提供,生产许可证号:SCYK()2020-0007,质量合格证号:46002100001283。饲料由长沙市天勤生物技术有限公司提供,生产许可证号:SCXK()2019-0013,质量合格证号:4307372100001621。实验动物使用许可证号:SYXK()2020-0021,动物实验室温度:20.0~26.0 ℃ ,湿度:40 %~70 %

1.3 实验方法

    两个样品都采用限量法[11]动物实验前禁食6 h自由饮水。选KM小鼠40只,雌雄各半,体重18.2~22.0 g。以受试液分别进行试试验,对小鼠灌胃1次,Kg体重的灌胃容量为20 mL热科2号奇楠沉香和叶片的每Kg体重给药剂量为10.0 g。给药后,观察动物的一般状况、中毒表现及死亡情况,观察期为14 d。实验结束时称动物体重,处死动物进行大体解剖检查。按限量法求得雌雄小鼠急性经口LD50,并进行急性经口毒性分级标准判断。

实验结果

      2.1 热科2号奇楠沉香:试验期间,实验动物生长良好,活动、摄食、饮水正常毛色光泽度好,未见明显中毒症状和死亡,到期处死动物进行大体解剖检查,各脏器未见异常。雄性小鼠经口LD50 > 10.0 g/Kg,雌性小鼠经口LD50 > 10.0 g/Kg(如表1所示)。根据急性毒性分级标准,受试物热科2号奇楠沉香属无毒级物质。

热科2号奇楠沉香的小鼠急性经口毒性实验结果±s

动物性别

剂量

(g/Kg)

动物数/只

体重

死亡数/只

LD50

(g/Kg)

始重g

终重g

雄性

10.0

10

21.0±1.2

40.0±3.3

0

>10.0

雌性

10.0

10

20.8±1.4

32.9±2.0

0

>10.0

       2.2 热科2号奇楠沉香叶:试验期间,实验动物生长良好,活动、摄食、饮水正常,毛色光泽度好,未见明显中毒症状和死亡,到期处死动物进行大体解剖检查,各脏器未见异常。雌雄小鼠经口急性毒性LD50 > 10.0 g /Kg(如表2所示)。根据急性毒性分级标准,受试物热科2号奇楠沉香叶属无毒级物质。

热科2号奇楠沉香叶的小鼠急性经口毒性实验结果±s

动物性别

剂量

(g/Kg)

动物数/

体重

死亡数/

LD50

/(g/Kg)

始重/g

终重/g

雄性

10.0

10

21.3±0.7

36.3±2.2

0

>10.0

雌性

10.0

10

20.8±1.4

31.6±2.1

0

>10.0

结论与讨论

    急性经口毒性是评价受试物毒性作用最基本的一项试验,可为急性毒性分级提供参考依据。本研究对热科2号奇楠沉香及其叶片进行急性经口毒性试验,结果显示,未见实验动物出现不良反应,无动物死亡,雌雄小鼠每Kg体重急性毒性LD50剂量均大于10.0 g根据急性毒性剂量分级标准,热科2奇楠沉香及其叶片属于无毒级物质。急性经口毒性试验初步评价热科2号奇楠沉香及其叶片的提取物对人体无急性毒作用,可以为下阶段深入开展长期毒性、生殖毒性试验和致突变试验等研究提供参考。

    热科2号奇楠沉香提取物的给药剂量每Kg体重大于10.0 g,换算为成人(60 Kg)的最大口服剂量为500.0 g[11],而《中华人民共和国药典》规定成人服用沉香药材的每日常用剂量为1~5 g。因此,可认为成人以临床常用量食用栽培奇楠沉香是安全可行的,研究结果为促进栽培奇楠沉香药用和食用的开发利用提供参考。

参考文献

    [1]黄圣卓,梅文莉,曾军,.奇楠本草及其历史渊源考证 [J].中国热带农业, 2021, 1: 41-48.

    [2]明•方以智.张柏春,孙显斌,等校注.物理小识 [M].长沙:湖南科学技术出版社, 2019, 1-851.

    [3]明•卢之熙,刘理狂,蔡群,等校注.本草乘雅半偈 (中国古医籍整丛书)[M]. 北京:中国中医药出版社: 2016, 1-525.

    [4]万秀锋.清前期宫廷使用伽南香述略[J].历史档案, 2013, 1: 135-138.

    [5]清•龙柏苏颖赵宏岩等校注.北京:脉药联珠药性食物考(中国古医籍整丛书)[M].北京:中国中医药出版社: 2016, 1-524.

    [6]李薇,梅文莉,董文化,.国产绿奇楠沉香的化学成分研究 [J].热带亚热带植物学报, 2019, 27 (2):196-202.

    [7]杨德兰,梅文莉,杨锦玲,. GC-MS分析4种奇楠沉香中致香的倍半萜和2-2-苯乙基)色酮类成分[J].热带作物学报, 2014, 35: 1235-1243.

    [8]王宇光,王军,杨锦玲,.白木香品种热科2沉香化学成份的GC-MS分析[J].热带农业科学, 2020, 40: 79-89.

    [9]Li Yang, Jin-ling Yang, Wen-Hua Dong, et alThe Characteristic Fragrant Sesquiterpenes and 2-(2-Phenylethyl)chromones in Wild and Cultivated “Qi-Nan” Agarwood [J]. Molecules, 2021, 26 (2): 436-448.

    [10]王雅丽,李薇,曾军,.栽培奇楠沉香精油中致香成分的GC-MS分析[J].中国热带农业, 2021, 1: 89-97.

    [11]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. GB 15193.3-2014 食品安全国家标准 急性经口毒性试验[S]. 2014.12.24.

 

 

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