细胞冻存和复苏是细胞培养中的关键环节，直接影响细胞存活率和活力，关系到后续细胞实验能否按照计划有效地进行。要想做好细胞冻存和复苏，首先请牢记下面这四个字：
慢冻快融！
1、为什么要慢冻快融？
冻存细胞时，细胞内外环境中的水会形成冰晶。如果直接将细胞冻存到 -196℃ 的液氮中，由于冻结过程中胞外溶液中的水先结冰，使胞外溶液不断浓缩，引起细胞电解质升高、渗透压改变、脱水及蛋白质变性等，会导致细胞受到机械性损伤。
2、细胞冻存-让你细胞安心沉睡
3、细胞复苏-让细胞满血复活
■ 细胞拿取
尽量减少样品从液氮或 -80℃ 取出到放置在解冻装置中之间被动升温的时间，否则会大大影响细胞活力。如果储存装置和解冻装置相隔较远，可使用装有干冰 (-80°C) 或液氮 (-196°C) 的隔热容器临时保存和运送细胞。
复苏后第二天发现细胞没有活？好不容易复苏的细胞竟然污染了？怎么才能让细胞满血复活呢？继续和小 M 一起往下看吧！■ 细胞拿取
尽量减少样品从液氮或 -80℃ 取出到放置在解冻装置中之间被动升温的时间，否则会大大影响细胞活力。如果储存装置和解冻装置相隔较远，可使用装有干冰 (-80°C) 或液氮 (-196°C) 的隔热容器临时保存和运送细胞。(注意：从液氮中取细胞时要佩戴护目镜和手套，谨防冻伤及冻存管爆炸！)
■ 解冻方式a) 解冻细胞时需要快速升温 (50~100℃/min) 才能最大保存细胞活力，解冻方式是 37℃ 水浴[3]。从液氮或 -80℃ 取出冻存的细胞后，稍拧松管盖，防止解冻过程中冻存管炸裂。放入 37℃ 水浴中，持续摇晃 1-2 分钟直至解冻。
通常建议在可见冰融化但样品仍然冰冷(~0℃)时立即停止解冻，常见的做法是在只剩下一小片冰时从水浴锅中取出样品。升温至室温或更高温度会增加冷冻保护剂的细胞毒性，这会极大影响细胞活力[1]。
b) 不建议室温解冻细胞，因为这会导致细胞死亡。
c) 为降低污染风险，水浴解冻时冻存管管口要高于水面，避免水流入冻存管，水浴锅中的无菌水也要定期更换。
■ 稀释
解冻后应尽快稀释，以减少 DMSO 的细胞毒性。按照培养基：冻存液 ≥10:1 的比例加入培养基进行稀释，然后离心并更换培养基重悬细胞，这样可以减少由渗透压变化导致的细胞应激。
■ 换液
依据细胞状态，在细胞贴壁后或 24 h 后换液，继续培养。