如何避免胎牛血清使用时出现黑点

　　在细胞培养过程中，经常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，最常使用的Gibco胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果，我们在实验中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培养293T细胞，效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根据具体细胞选择合适的Gibco胎牛血清浓度。

　　为防止客户由于操作方面而使黑点生成的办法。对此一定要做好以下几点。方可使细胞培养顺利。

　　（1）尽可能地减少血清冻融次数。

　　（2）培养基无需37℃水浴。

　　（3）培养基保持PH值7.0-7.2。

　　（4）严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

　　（5）掌握细胞传代的时机，细胞切勿生长过老。

　　1、化冻将血清从-20度冰箱中取出，室温（或浸于自来水中）化冻（约需要30分钟至2小时，也可放于4度冰箱化冻过夜；化冻后若不马上灭活，可以放入4度冰箱中暂时保存）

　　2、灭活

　　（1）放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个空的血清瓶，内装100ml自来水，插入一根温度计，温度监控以此为准）

　　（2）当温度计显示56度时，停止加热，改为间断加热，维持56度（±0.5度）30分钟（±3分钟；若不小心使温度上升超过56度，则：若仍未超过60度，且时间很短，比如不超过5分钟，则仍可使用；若超过60度，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于一些普通细胞的培养）

　　（3）取出，自然冷却至室温（约需1-3小时），可分装或-20度继续冻存。

　　3、分装

　　（1）转入无菌间，在超净台内将血清分装入10ml离心管中（注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；用吸液管或吹大管吹出血清时要注意：不要吹出气泡（血清很粘稠，很容易产生气泡；如果产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下））

　　（2）放入-20度冰箱冻存

　　（3）全部操作约需要4-6小时