詳細介紹
產(chǎn)品簡介
DH10Bac 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)
DH10Bac 菌株主要用于生產(chǎn)重組桿狀病毒分子（Bac-to-Bac 桿狀病毒表達系統(tǒng)）。該菌株中含有父
本 bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124；其中， bMON14272 中包含 mini-F 復(fù)制子, 卡那抗
性基因, attTn7 位點和 lacZα 互補因子；而輔助質(zhì)粒 pMON7124 含有 tnsABCD 區(qū)，可表達轉(zhuǎn)座蛋白
來幫助把供體質(zhì)粒上的 mini-Tn7 插入到父本的 bacmid 上的靶標位點。當(dāng) DH10Bac 感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化
了在多克隆位點克隆了外源片段的供體質(zhì)粒(如 pFastBac)時，該菌株可生成復(fù)合 bacmid。DH10Bac
菌株攜帶 ?80lacZΔM15 突變，因此可用于藍白斑篩選實驗。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，DH10Bac 感
受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率可達 108 cfu/μg DNA。
DH10Bac 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)
產(chǎn)品組成
組分 CC96136-01 CC96136-02 CC96136-03
DH10Bac
化學(xué)感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL
nupG /pMON14272 / pMON7124
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA
DH10Bac 化轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化DNA加入到100 μL感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30 min；
3. 將離心管置于42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激90s后，立刻置于冰浴中靜置2-3 min；
4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37 ℃預(yù)熱），后置于37 ℃搖床復(fù)壯45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化DNA的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化DNA后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保.高轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。