酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA分子生物學實驗，是一種利用抗體分子能與抗原分子特異性結(jié)合的特點，將游離的雜蛋白和結(jié)合于固相載體的目的蛋白結(jié)合，并利用特殊的標記物對其定性或定量分析的一種檢測方法。

酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA 實驗?zāi)康?/span>

酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA分子生物學實驗的主要目的是檢測血清中特定的抗原或抗體，以達到定性或定量判斷的目的。它廣泛應(yīng)用于醫(yī)學、生物學和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域，特別是在疾病診斷、疫苗研發(fā)和食品安全檢測中發(fā)揮著重要作用。

酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA 實驗原理

ELISA的基本原理是利用抗原或抗體與待測物的特異性結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。具體過程如下：

1.抗原或抗體能物理性地吸附于固相表面(如聚苯乙烯等)，并且保持其免疫活性。

2.抗原或抗體能與酶通過共價鍵形成酶結(jié)合物，同時保持各自的免疫活性或酶活性。

3.在測定時，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開。

4.加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物。產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA 實驗儀器與試劑

儀器：酶免儀(酶聯(lián)免疫吸附試驗儀器)，用于檢測和定量分析特定抗體或抗原。

試劑：

1.固相載體：如聚苯乙烯微量反應(yīng)板。

2.抗原或抗體：用于特異性結(jié)合待測物。

3.酶標記的二抗體：用于與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合，并催化底物產(chǎn)生顏色變化。

底物：如鄰苯二胺(OPD)、聯(lián)大茴香胺(OD)等，可被酶催化產(chǎn)生顏色變化。

終止液：用于終止酶催化反應(yīng)，使顏色變化穩(wěn)定。

酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA 實驗步驟

1.抗原或抗體的固定：將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面。

2.待測樣本的加入：將待測樣本加入反應(yīng)孔中，與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合。

3.酶標記的二抗體的加入：加入酶標記的二抗體，與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。

4.底物的加入產(chǎn)生顏色變化：加入底物溶液，底物在酶的作用下發(fā)生顏色變化。

5.終止反應(yīng)并測定吸光度：加入終止液終止反應(yīng)，用光度計測定反應(yīng)孔中的吸光度。根據(jù)吸光度的變化可以推斷出待測抗原或抗體的濃度。

酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA 實驗注意事項

1.樣本處理：樣本必須為液體，不含沉淀。在采集和保存樣本時，應(yīng)注意避免反復(fù)凍融和污染。

2.試劑選擇：應(yīng)選擇純度好、特異性強的抗原或抗體作為包被物。酶標記的二抗體應(yīng)選擇活性高、穩(wěn)定性好的酶標記物。

3.操作規(guī)范：在實驗過程中，應(yīng)嚴格按照操作步驟進行，避免交叉污染和誤差的產(chǎn)生。

4.結(jié)果分析：在分析結(jié)果時，應(yīng)注意對照孔的設(shè)置和結(jié)果的比對，以確保結(jié)果的準確性和可靠性。

【本公司合作項目】

病理檢測：石蠟包埋、切片、HE染色、masson染色、番紅固綠染色、天狼星紅染色、免疫組化、免疫熒光單標/雙標/多標、全景掃描、激光共聚焦拍照等。

分子生物學實驗：熒光定量PCR檢測、Western blot檢測、血常規(guī)、生化酶活、ELISA檢測等。

細胞實驗：耐藥細胞株構(gòu)建、細胞毒性實驗、細胞遷移實驗、細胞侵襲實驗、細胞流式周期檢測、細胞流式凋亡檢測等。

動物實驗：動物模型構(gòu)建、動物飼養(yǎng)服務(wù)、動物臨床前研究、藥效評價、功能性評價等。

微生物學實驗：抑菌試驗、藥敏試驗、菌種鑒定、微生物多態(tài)性分析等實驗。