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靈長類胚胎干細(xì)胞/誘導(dǎo)多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（無飼養(yǎng)層培養(yǎng)）

ReproFF2 

◆特點(diǎn)

●　一周只需處理細(xì)胞三次

●　只需常規(guī)培養(yǎng)基用量的一半

●　維持干細(xì)胞的未分化狀態(tài)

●　維持干細(xì)的分化能力

注1）由于不含bFGF，請?jiān)谂囵B(yǎng)人iPS/ES細(xì)胞時(shí)添加。

※保存溫度：-20℃

※含有醫(yī)藥用以外的劇毒物0.0008％的2-巰.基乙醇

◆優(yōu)勢

●　反復(fù)凍融的細(xì)胞依然保持存活。

●　具有長期培養(yǎng)核型穩(wěn)定性。

●　轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基后細(xì)胞傳代培養(yǎng)狀態(tài)穩(wěn)定。操作簡便。

●　iPS細(xì)胞系菌落完整且免疫染色為陽性

◆產(chǎn)品概念：周末無需處理

◆無飼養(yǎng)層ReproFF2培養(yǎng)基對(duì)干細(xì)胞未分化狀態(tài)的維持

維持人iPS細(xì)胞的未分化狀態(tài)的培養(yǎng)

●　使用201B7株人iPS細(xì)胞

●　ReproFF2（無飼養(yǎng)層）培養(yǎng)：Passage 10.day 3

●　飼養(yǎng)層培養(yǎng)：Passage 48.day 3

1.菌落的形態(tài)和堿性磷酸酶活性的確認(rèn)

　　圖為使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞有著相似的菌落形態(tài)和堿性磷酸酶活性陽性。

　　把細(xì)胞移到ReproFF2培養(yǎng)基后，可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)惡化的情況，但繼續(xù)傳代培養(yǎng)的話，狀態(tài)就會(huì)穩(wěn)定下來。

2.未分化標(biāo)記物的免疫染色結(jié)果

　　用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞相似，都能表達(dá)Oct3/4,Nanog,SSEA-1,TRA-1-60。

3.未分化標(biāo)記物的FACS分析

　　用ReproFF2培養(yǎng)基無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞顯示了相似的陽性率。

4.長期培養(yǎng)時(shí)核型的穩(wěn)定性

　　對(duì)使用ReproFF2連續(xù)培養(yǎng)到第30代的人iPS細(xì)胞的核型進(jìn)行分析。結(jié)果顯示， ReproFF2培養(yǎng)基適合穩(wěn)定長期的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)。

5.人ES細(xì)胞的未分化維持培養(yǎng)

　　使用KhES-1株人ES細(xì)胞

　　使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人ES細(xì)胞顯示為堿性磷酸酶染色陽性、Oct3/ 4陽性、未分化性得到良好的維持。

◆使用ReproFF2培養(yǎng)基培養(yǎng)人iPS細(xì)胞時(shí)，菌落狀態(tài)不好的情況

　　ReproFF2雖然是適合培養(yǎng)人ES/iPS細(xì)胞的培養(yǎng)基，但是，根據(jù)培養(yǎng)操作等狀況的不同，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)菌落狀態(tài)惡化的情況。

　　如出現(xiàn)以下所述的情況是沒有問題的，請遵從下文指示放心繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞移到ReproFF2培養(yǎng)基后菌落的形態(tài)

　　把細(xì)胞移到ReproFF2培養(yǎng)基后，可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)惡化的情況（見下左圖）。

　　繼續(xù)進(jìn)行傳代培養(yǎng)的話，狀態(tài)將會(huì)穩(wěn)定下來（見下右圖），請繼續(xù)第4代的傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞移到ReproFF2培養(yǎng)基的第三天                  傳代培養(yǎng)到第四代的第六天

（狀態(tài)差的菌落）                                               （恢復(fù)狀態(tài)的菌落）

使用ReproFF2培養(yǎng)基傳代后的情況（傳代時(shí)菌落太小的情況）

　　傳代培養(yǎng)后，下左圖的細(xì)胞可能是傳代培養(yǎng)時(shí)菌落過小的情況。

　　解決方法：減少移液的次數(shù)或者降低移液管的強(qiáng)度。

  傳代培養(yǎng)時(shí)，菌落太小　                           菌落在200-300um中傳代培養(yǎng)

                                                                          （菌落大小恢復(fù)正常）

◆ReproFF2培養(yǎng)基無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞的分化能力

　　使用ReproFF2培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞相似，都有向心肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞分化的能力。

人iPS細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化

　　把使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化，結(jié)果得到表達(dá)心肌標(biāo)記物陽性的跳動(dòng)心肌細(xì)胞團(tuán)。

　　由此得出，使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞一樣，擁有向心肌細(xì)胞分化的能力。

※α-MHC, Connexin-43, Cardiac Troponin T: 心肌標(biāo)記物

人iPS細(xì)胞向神經(jīng)前體細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的分化

　　使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化，形成玫瑰花結(jié)構(gòu)（rosette），可以觀察到βIII-tubulin的表達(dá)以及TH陽性的神經(jīng)細(xì)胞。

　　由此得知，使用ReproFF2無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的人iPS細(xì)胞和有飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞一樣，擁有向神經(jīng)細(xì)胞分化的能力。

※βIII-tubulin：神經(jīng)纖維的標(biāo)記物

※rosette：神經(jīng)前體細(xì)胞的標(biāo)記物形態(tài)的特征
※TH (Tyrosine 3-Hydroxyrase)：多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞的標(biāo)記物

◆相關(guān)產(chǎn)品