詳細(xì)介紹
生物體組織透明化新技術(shù)SCALEVIEW®-A2
宮脇敦史博士等人開發(fā)了一種水溶狀態(tài)下不會(huì)損壞熒光蛋白，可簡(jiǎn)便使生物體組織透明化的方法。
對(duì)于福爾馬林固定的樣本，SCALEVIEW®-A2是不破壞其光吸收和熒光，同時(shí)可減少光散射的水溶性溶液。僅需將哺乳類動(dòng)物大腦等生物體組織浸泡于SCALEVIEW®-A2中，即可透明化。SCALEVIEW®-A2光學(xué)特性——折射率ne（20℃）為1.377-1.381。
HP數(shù)據(jù)：理化學(xué)研究所 腦科學(xué)綜合研究中心細(xì)胞機(jī)能探索技術(shù)開發(fā)小組濱裕先生、宮脇敦史提供
合作：奧林巴斯（Olympus）株式會(huì)社
參考文獻(xiàn)：Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).
◆SCALEVIEW®-A2 操作
以透明化小鼠大腦為樣本，SCALEVIEW®-A2透明化方法操作如下：
1. 固定
① 用4% 多聚甲醛(PFA)/PBS（pH 7.5～8.0）對(duì)小鼠進(jìn)行灌流固定。
② 取出小鼠大腦后，用4%PFA/PBS固定（4℃、10h）， 20% 蔗糖/PBS置換（4℃、24h）。
③ 用OCT復(fù)合物對(duì)小鼠大腦進(jìn)行包埋處理后，液氮進(jìn)行冷凍。
④ 用PBS對(duì)冷凍腦組織解凍、清洗后，再用4% PFA/PBS進(jìn)行再固定（室溫、20min）
2. 透明化處理
⑤ 將固定好的小鼠大腦浸泡在SCALEVIEW®-A2中（室溫）。
注意點(diǎn)：
?。保總€(gè)成年小鼠大腦需要使用30mL以上的SCALEVIEW®-A2。
?。玻该骰枰?周以上時(shí)間。浸泡過程中，需在混勻器等設(shè)備中慢慢輕晃溶液。每天更換一次SCALEVIEW®-A2溶液，效果更佳。
３．通過SCALEVIEW®-A2溶液浸泡后，小鼠大腦體積會(huì)單方向膨脹10~30%水平。
3. 觀察
⑥ 觀察SCALEVIEW®-A2處理后的小鼠大腦樣品使用雙光子激光顯微鏡、奧林巴斯（Olympus）公司XLPLN25SVMP多光子物鏡。或使用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。
⑦ 觀察結(jié)束后，可將小鼠大腦再次浸泡于SCALEVIEW®-A2溶液中，保存溫度4℃。
◆SCALEVIEW®-A2處理案例
圖1. SCALEVIEW®-A2透明化小鼠大腦案例
從左往右： SCALEVIEW®-A2處理前的小鼠大腦；SCALEVIEW®-A2浸泡兩周后的小鼠大腦
◆SCALEVIEW®-A2觀察案例
圖2. 雙光子激光顯微鏡下獲取的Thy1-H小鼠大腦深層觀察圖像
使用奧林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XWMP多光子物鏡觀察圖像
比例尺：50 μm
圖3. 雙光子激光顯微鏡下獲取的Thy1-H小鼠大腦深層觀察圖像
使用奧林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XSVMP（NA.1.0 WD4 mm）多光子物鏡觀察圖像
圖4. 激光共聚焦顯微鏡下獲取的小鼠胰臟透明化圖像
對(duì)小鼠進(jìn)行灌流固定處理前，先使用Lectin Texas red對(duì)流入血管進(jìn)行標(biāo)記處理。灌流固定后，取出胰臟并用SCALEVIEW®-A2進(jìn)行處理。圖為奧林巴斯（Olympus）公司物鏡：UPLSAPO30XS觀察下的圖像。
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級(jí) |
| 193-18455 | SCALEVIEW® 組織透明化試劑A2 | 500 mL | 組織透明化用 |
| 相關(guān)產(chǎn)品 | |||
| 160-16061 | 多聚甲醛 | 100 g | 組織固定用 |
| 162-16065 | 多聚甲醛 | 500 g | 組織固定用 |
| 167-25981 | 16w/v%低聚甲醛溶液 | 1 mL×10A | 電子顯微鏡用 |
| 163-25983 | 16w/v%低聚甲醛溶液 | 10 mL×10A | 電子顯微鏡用 |
| 164-25511 | 1×PBS(-)平衡緩沖液 | 5 L | 生化學(xué)用 |
| 192-00012 | 蔗糖 | 25 g | 試劑特級(jí) |
| 194-00011 | 蔗糖 | 100 g | 試劑特級(jí) |
| 196-00015 | 蔗糖 | 500 g | 試劑特級(jí) |
生物體組織透明化新技術(shù)SCALEVIEW®-A2