传统转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素如阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。
Gibco血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基,转染后4-6h在更换成有血清培养基,这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性。
可使用非脂质体的转染试剂,比如纳米材料试剂,转染过程中就可以加血清,这样也可以提高细胞转染效率。
不同细胞及转染试剂要求转染的条件是不同的。可在一次实验前做一个预实验,细胞是否加血清,对不同的细胞是有不同的影响的,有些细胞是可以有血清的,有些加Gibco血清就会受影响。所以,普通的转染试剂一定要进行预实验和条件优化。
细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。因此,选择一种高效方便的转染试剂是细胞转染成功的关键。