Diabetologia：激活但功能性受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身血清到消失1标准型白血病临床学术研究病因的令人满意率在学龄前时期就有极好的描绘出，多个口内自身血清白血病的学龄前中会有70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的学龄前这一数目增高到84%。相较之下，占多数临床学术研究1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的中风机制还很难赢取充分的学术研究。

越来越多的人开始适用分期系统来并不一定1标准型白血病的令人满意：个体在消失多种口内自身血清时转到第1下一阶段，消失血糖异常时转到第2下一阶段，消失病因时转到第3下一阶段。一些多发口内自身血清白血病的个体，在1期和2期，令人满意总括快，并发展为中风的1标准型白血病。我们在此之前描绘出了一两组在首次定期检查到多种口内自身血清取样后有数10年无白血病的太快令人满意者，这两组病征人数少，但不同之处更加确实。随后，我们断定口内自身复合物特异性CD8+T细胞膜重排在令人满意减快的病征中会基本不存在，但在近期中风和长期存在的白血病病征中会很更易定期检查到。这可能声称，与令人满意病征相较，这些病征性疾病重排的调节加强。

后期学术研究声称，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量较长时间，但白血病病征存在一些新功能缺陷，其中会包括对IL-2的重排能力减小。此外，白血病病征中会的物理现象CD4+T细胞膜可能对调节不具抵抗性，体现为物理现象T细胞膜的可抑制减弱，自然转化成的Treg和体外转化成的诱发Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞膜中会IL-2重排减弱。本学术研究的目的是描绘出了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群总括减快令人满意者中会的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以这群人为了将的平行学术研究，在21岁请注意确诊的病征亲戚中会定期检查1标准型白血病的危险主因。我们在此之前描绘出了长期减快令人满意者的不同之处，他们持续保持多重口内自身血清白血病最多10年，但很难消失白血病的临床学术研究病因，快性或非顺利进行性性疾病。随后，10名继续持续保持无白血病并愿意提供大量血浆取样的减快令人满意者纳入T和B细胞膜新功能分析方法。在目前的学术研究中会，8名快令人满意者(SP两组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的口内自身血清白血病。所有的自发性都受制于1标准型白血病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了口内自身血清对某些复合物的白血病重排，然而，一名病征已经受制于2期有数6年，但很难消失临床学术研究病因，一名病征被确诊为白血病，该受试者72岁，在通过观察实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法中会对该小分子顺利进行了单独评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜法术和T细胞膜可抑制试验评估小分子中会Treg的频谱、表标准型和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重回)顺利进行无监督聚类分析方法，评估Treg表标准型。

结果：与身体健康小分子相较，来自快令人满意体的知觉CD4+T细胞膜的监督聚类说明了，激已逝的知觉CD4+ Treg频谱增高，与糖皮质激素诱发的TNFR就其蛋白(GITR)强调增高有关。一名HbA1c升高的病征与令人满意减快者和冗余的对照两组相较，Treg谱有所不同。新功能分析方法声称，与身体健康小分子相较，来自减快令人满意体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞膜可抑制值得注意受损。体现为对物理现象CD4+T细胞膜CD25和CD134强调的可抑制增高。

左图1 有系统的表标准型分析方法说明了，CD4+Treg亚标准型在快令人满意路由表中会增高。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有小分子的已逝CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示成物强调鉴定成10个元簇:知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)适用9个不同Treg标示成聚合的10个元簇的MST。每个节点代表人一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点两组周边上色。每个节点中会的饼左图对此单个标示成的强调高至。(b)每个元聚类的热左图，以说明了整体标示成强调。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)聚合左图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的大块。(e-l)相对于原子量为每个metacluster装该线左图(原子量> 0.05%)相符为HD和SP两组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞膜(l)。橘色橘色代表人捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 适用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频谱的增高是令人满意减快的徽章。分级门控(a - f)和柑橘分析方法(g-k)比较SP自发性和冗余的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞膜上的相异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表人性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)两组以及小分子SP 606(橘色)中会CD25+ cd127的频谱核心内容左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的装该线左图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头突成的簇被鉴别为SP和HD路由表二者之间的不同。(j)装该线左图说明了了在SP(布氏)和HD(灰点)两组中会，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对于原子量(数目)。(k)概率分布说明了每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标示成相对于强调与背景强调(红色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中会标示成的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身体健康献血者相较，令人满意减快者知觉treg的GITR增高。每个知觉CD4+T细胞膜元簇(知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)定期检查每个强调标示成的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的强调热左图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中会所有HD(黄色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR强调接在，说明了概率分布(c)和核心内容左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有小分子包括，p< 0.05(红色)小分子SP 606和冗余的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR强调，从分级门控，从所有HD(黄色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)接在，说明了概率分布(e)和核心内容左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自减快令人满意的CD4+ treg细胞膜控制物理现象CD4+T细胞膜的能力减小。SP两组用红色的该线和橘色对此，HD两组用黄色的该线和橘色对此，橘色的该线/橘色对此小分子sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标示成为CFSE, Treg按仔细观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞膜，人才3翌日顺利进行流式细胞膜法术定期检查。(a-d)与CD4+此番者相对于应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者人才。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE可抑制%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制%-。适用白血病对照(激已逝的响应细胞膜都有treg)计算可抑制%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 物理现象CD4+T细胞膜对减快令人满意的T细胞膜已逝化的可抑制更敏感。SP两组用红色的该线和橘色对此，HD两组用黄色的该线和橘色对此，橘色的该线/橘色对此小分子sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示成，treg按仔细观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞膜，人才3翌日顺利进行流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同人才。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中会的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得成结论：我们得成的得成结论是，来自减快令人满意子的已逝化知觉CD4+Treg在GITR强调中会赢取了扩展和丰富，强调了进一步学术研究Treg在1标准型白血病风险个体中会的表型的有效性。

书名成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28